Publicaciones - Instituto Salk de Estudios Biológicos

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Zhou, J., Zhang, Z., Wu, M., Liu, H., Pang, Y., Bartlett, A., Peng, Z., Ding, W., Rivkin, A., Lagos, WN, Williams , E., Lee, CT, Miyazaki, P.A., Aldridge, A., Zeng, Q., Salinda, JLA, Claffey, N., Liem, M., Fitzpatrick, C., Boggeman, L., Yao, Z. , Smith, K.A., Tasic, B., Altshul, J., Kenworthy, M.A., Valadon, C., Nery, J.R., Castanon, RG, Patne, N.S., Vu, M., Rashid, M., Jacobs, M. , Ito, T., Osteen, J., Emerson, N., Lee, J., Cho, S., Rink, J., Huang, H.H., Pinto-Duartec, A., Domínguez, B., Smith, J.B. , O'Connor, C., Zeng, H., Chen, S., Lee, KF, Mukamel, EA, Jin, X., Margarita Behrens, M., Ecker, J.R., Callaway, E.M. Correspondencia en todo el cerebro de la epigenómica neuronal y las proyecciones distantes. (2023) Naturaleza. 624(7991):355-365. DOI: 10.1038/s41586-023-06823-w

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Kang, SJ, Liu, S., Ye, M., Kim, DI, Pao, GM, Copits, BA, Roberts, BZ, Lee, KF, Bruchas, MR, Han, S. Un sistema de alarma central que envía señales de amenazas innatas multisensoriales a la amígdala. (2022) Informes de celda. 40(7):111222. DOI: 10.1016/j.celrep.2022.111222

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Jovanovic, V., Fishbein, AR, de la Mothe, L., Lee, KF, Molinero, CT El contexto conductual afecta las representaciones de señales sociales dentro de las neuronas de la corteza prefrontal de un solo primate. (2022) Neuron. DOI: 10.1016 / j.neuron.2022.01.020

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Zhang, Z., Zhou, J., Tan, P., Pang, Y., Rivkin, AC, Kirchgessner, MA, Williams, E., Lee, CT, Liu, H., Franklin, AD, Miyazaki, PA, Bartlett, A., Aldridge, AI, Vu, M., Boggeman, L., Fitzpatrick, C., Nery, JR, Castanon, RG, Rashid, M., Jacobs, MW, Ito-Cole, T., O' Connor, C., Pinto-Duartec, A., Domínguez, B., Smith, JB, Niu, SY, Lee, KF, Jin, X., Mukamel, EA, Behrens, MM, Ecker, JR, Callaway, EM Diversidad epigenómica de las neuronas de proyección cortical en el cerebro del ratón. (2021) Naturaleza. 598(7879):167-173. DOI: 10.1038/s41586-021-03223-w

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Los tipos de células neuronales se definen clásicamente por sus propiedades moleculares, anatomía y funciones. Aunque los avances recientes en la genómica unicelular han llevado a la caracterización molecular de alta resolución de la diversidad de tipos de células en el cerebro, los tipos de células neuronales a menudo se estudian fuera del contexto de sus propiedades anatómicas. Para mejorar nuestra comprensión de la relación entre las características moleculares y anatómicas que definen las neuronas corticales, aquí combinamos el etiquetado retrógrado con la secuenciación de metilación del ADN de un solo núcleo para vincular las propiedades epigenómicas neuronales con las proyecciones. Examinamos 11,827 neuronas neocorticales individuales de 63 proyecciones de larga distancia corticocorticales y corticosubcorticales. Nuestros resultados mostraron firmas epigenéticas únicas de neuronas de proyección que corresponden a sus patrones de proyección y ubicación laminar y regional. Sobre la base de sus epigenomas, las células intratelencefálicas que se proyectan a diferentes objetivos corticales podrían distinguirse aún más, y algunas neuronas de la capa 5 que se proyectan a objetivos extratelencefálicos (L5 ET) formaron grupos separados que se alinearon con sus proyecciones axonales. Tal separación varió entre las áreas corticales, lo que sugiere que existen diferencias específicas del área en los subtipos de L5 ET, que fueron validadas por estudios anatómicos. En particular, una población de neuronas de proyección corticocortical se agruparon con L5 ET en lugar de neuronas intratelencefálicas, lo que sugiere que una población de neuronas corticales L5 ET se proyecta a ambos objetivos. Verificamos la existencia de estas neuronas mediante marcaje retrógrado dual y rastreo anterógrado de neuronas de proyección corticocortical, que revelaron terminales de axón en objetivos extratelencefálicos, incluidos el tálamo, el colículo superior y la protuberancia. Estos hallazgos destacan el poder de los enfoques epigenómicos unicelulares para conectar las propiedades moleculares de las neuronas con sus propiedades anatómicas y de proyección.

Liu, S., Kim, DI, Oh, TG, Pao, GM, Kim, JH, Palmiter, RD, Banghart, MR, Lee, KF, Evans, RM, Han, S. Base neural de la depresión respiratoria inducida por opioides y su rescate. (2021) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 118(23). DOI: 10.1073/pnas.2022134118

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Lee, EY, Chan, LC, Wang, H., Lieng, J., Hung, M., Srinivasan, Y., Wang, J., Waschek, JA, Ferguson, AL, Lee, KF, Yount, Nueva York, Yeaman, MR, Wong, GCL PACAP es un neuropéptido antimicrobiano residente inducible por patógenos que proporciona una defensa molecular rápida y contextual del huésped del cerebro. (2021) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 118(1). DOI: 10.1073/pnas.1917623117

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La defensa del sistema nervioso central (SNC) contra la infección debe lograrse sin la generación de inflamación mediada por células inmunitarias o fuera del objetivo potencialmente dañina que podría afectar las funciones clave. Dado que el SNC es un compartimento inmunoprivilegiado, es probable que los mecanismos de defensa innatos inducibles endógenos al SNC desempeñen un papel esencial en este sentido. El polipéptido activador de la adenilato ciclasa pituitaria (PACAP) es un neuropéptido conocido por regular el neurodesarrollo, las emociones y ciertas respuestas al estrés. Si bien se sabe que PACAP interactúa con el sistema inmunitario, no se ha establecido su importancia en la defensa directa del cerebro u otros tejidos. Aquí, mostramos que nuestro clasificador de aprendizaje automático puede detectar actividad inmune en neuropéptidos e identificó correctamente PACAP como un neuropéptido antimicrobiano de acuerdo con el trabajo experimental anterior. Además, la dispersión de rayos X de sincrotrón, los ensayos antimicrobianos y las huellas dactilares mecánicas proporcionaron información precisa sobre cómo PACAP ejerce actividades antimicrobianas frente a los patógenos a través de múltiples mecanismos sinérgicos, incluida la desregulación de la integridad y la energía de la membrana y la activación de las vías de muerte celular. Es importante destacar que el PACAP residente se induce selectivamente hasta 50 veces en el cerebro en modelos de ratón o infección in vivo, sin inducir la infiltración de células inmunitarias. Mostramos la inducción diferencial de PACAP incluso en varios tejidos fuera del SNC, y cómo estos patrones de inducción observados son consistentes con la eficacia antimicrobiana de PACAP medida en condiciones que simulan contextos fisiológicos específicos de esos tejidos. El análisis filogenético de PACAP reveló una estrecha conservación de las propiedades antimicrobianas predichas que abarcan desde los invertebrados primitivos hasta los mamíferos modernos. Juntos, estos hallazgos corroboran nuestra hipótesis de que PACAP es un antiguo efector neuroendocrino-inmune que defiende el SNC contra infecciones mientras minimiza la neuroinflamación potencialmente dañina.

Liu, Y., Sugiura, Y., Chen, F., Lee, KF, Ye, Q., Lin, W. El bloqueo de DHPRs/Ryr1 del músculo esquelético previene la pérdida de sinapsis neuromuscular en ratones mutantes deficientes en Neuregulina 1 tipo III (CRD-Nrg1). (2019) Genética PLOS. 15(3):e1007857. DOI: 10.1371/journal.pgen.1007857

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Las células de Schwann son componentes integrales de las sinapsis neuromusculares de los vertebrados; en su ausencia, las terminaciones nerviosas presinápticas se retiran de los músculos postsinápticos, lo que provoca la denervación muscular y la pérdida de sinapsis en la unión neuromuscular en desarrollo (UNM). Aquí, informamos un rescate de la denervación muscular y la pérdida de sinapsis neuromuscular en ratones mutantes de neurregulina 1 tipo III (CRD-Nrg1-/-), que carecen de células de Schwann. Descubrimos que la denervación muscular y la pérdida de sinapsis neuromuscular se previnieron en ratones CRD-Nrg1-/- cuando la actividad presináptica se bloqueó mediante la ablación de un gen específico, como Snap25 (proteína de 25 kDa asociada a sinaptosomas) o Chat (colina acetiltransferasa). Además, estos efectos fueron mediados por una vía que requiere receptores de acetilcolina postsinápticos (AChR), porque la ablación de Chrna1 (subunidad α1 del receptor de acetilcolina), que codifica AChR específicos de músculo en ratones CRD-Nrg1-/-, también rescató la denervación muscular. Además, la ablación genética de la subunidad β1 del receptor de dihidropiridina muscular (DHPR) (Cacnb1) o el receptor de rianodina 1 (Ryr1) también rescató la denervación muscular y la pérdida de sinapsis neuromuscular en ratones CRD-Nrg1-/-. Por lo tanto, estas manipulaciones genéticas siguen una vía, desde presináptica a postsináptica y, en última instancia, a la actividad muscular mediada por DHPR y Ryr1. Es importante destacar que los análisis electrofisiológicos revelan una actividad sináptica sólida en las NMJ deficientes en células de Schwann rescatadas en ratones mutantes CRD-Nrg1-/-Cacnb1-/-o CRD-Nrg1-/-Ryr1-/-. Por lo tanto, un bloqueo de la actividad sináptica, aunque suficiente, no es necesario para preservar las NMJ que carecen de células de Schwann. En cambio, un bloqueo de la actividad muscular mediado por DHRP y Ryr1 es necesario y suficiente para preservar las NMJ que carecen de células de Schwann. Estos hallazgos sugieren que la actividad muscular mediada por DHPRs/Ryr1 puede desestabilizar las NMJ en desarrollo y que las células de Schwann juegan un papel crucial para contrarrestar dicha actividad desestabilizadora para preservar las sinapsis neuromusculares durante el desarrollo.

Gould, TW, Dominguez, B., de Winter, F., Yeo, GW, Liu, P., Sundararaman, B., Stark, T., Vu, A., Degen, JL, Lin, W., Lee, KF Las células gliales mantienen las sinapsis al inhibir una señal de proteasa retrógrada dependiente de la actividad. (2019) Genética PLOS. 15(3):e1007948. DOI: 10.1371/journal.pgen.1007948

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Yoon, YS, Tsai, WW, Van de Velde, S., Chen, Z., Lee, KF, Morgan, DA, Rahmouni, K., Matsumura, S., Wiater, E., Song, Y., Montminy, M. El coactivador CRTC3 inducible por cAMP atenúa la termogénesis del tejido adiposo marrón. (2018) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. DOI: 10.1073 / pnas.1805257115

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En respuesta a la exposición al frío, los mamíferos placentarios mantienen la temperatura corporal aumentando la actividad nerviosa simpática en el tejido adiposo pardo (BAT). La activación de los receptores β-adrenérgicos en los adipocitos marrones estimula la termogénesis a través de la inducción de la vía cAMP/PKA. Aunque la proteína de unión al elemento de respuesta de cAMP (CREB) y sus coactivadores, los coactivadores transcripcionales regulados por cAMP (CRTC), median los efectos transcripcionales de cAMP en la mayoría de los tejidos, otros factores de transcripción como ATF2 parecen ser críticos para la inducción de genes termogénicos por cAMP en BAT. . Los adipocitos marrones surgen de las células mesenquimatosas positivas para Myf5 bajo el control de PRDM16, un coactivador que al mismo tiempo reprime la diferenciación a lo largo del linaje del músculo esquelético. Aquí, mostramos que el coactivador CRTC3 de CREB es parte de una vía de retroalimentación inhibitoria que antagoniza la diferenciación dependiente de PRDM16. Los ratones con una inactivación de CRTC3 en BAT (BKO) tienen una mayor tolerancia al frío y una reducción de la adiposidad, mientras que los ratones que sobreexpresan CRTC3 constitutivamente activo en el tejido adiposo son más sensibles al frío y tienen una mayor masa grasa. CRTC3 redujo la actividad del nervio simpático en BAT al aumentar la expresión de miR-206, un microARN que promueve la diferenciación a lo largo del linaje miogénico y que mostramos aquí disminuye la expresión de VEGFA y neurotrofinas críticas para la inervación y vascularización de BAT. La actividad nerviosa simpática para BAT se mejoró en ratones BKO, lo que provocó aumentos en la señalización de catecolaminas que estimuló el gasto de energía. Como la reexpresión de miR-206 en BAT de ratones BKO revirtió los efectos saludables del agotamiento de CRTC3 en la tolerancia al frío, nuestros estudios sugieren que los inhibidores de molécula pequeña contra este coactivador pueden proporcionar un beneficio terapéutico a las personas con sobrepeso.

Chen, Z., Donnelly, CR, Domínguez, B., Harada, Y., Lin, W., Halim, AS, Bengoechea, TG, Pierchala, BA, Lee, KF Se requiere p75 para el establecimiento de la diversidad de neuronas sensoriales posnatales mediante la potenciación de la señalización Ret. (2017) Informes de celda. 21(3):707-720. DOI: 10.1016/j.celrep.2017.09.037

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Hirai, M., Arita, Y., McGlade, CJ, Lee, KF, Chen, J., Evans, SM Las proteínas adaptadoras NUMB y NUMBL promueven la retirada del ciclo celular al dirigirse a ERBB2 para su degradación. (2017) Revista de investigación clínica. 127(2):569-582. DOI: 10.1172/JCI91081

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Xu, J., de Winter, F., Farrokhi, C., Rockenstein, E., Mante, M., Adame, A., Cook, J., Jin, X., Masliah, E., Lee, KF Neurregulina 1 mejora los déficits cognitivos y la neuropatología en un modelo de enfermedad de Alzheimer. (2016) Informes Científicos. 6:31692. DOI: 10.1038/srep31692

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Chu, Q., Diedrich, JK, Vaughan, JM, Donaldson, CJ, Nunn, MF, Lee, KF, Saghatelian, A. La proteólisis HtrA1 de ApoE in vitro es selectiva de alelos. (2016) Revista de la Sociedad Química Estadounidense. 138(30):9473-8. DOI: 10.1021/jacs.6b03463

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Mo, AH, Landon, PB, Gomez, KS, Kang, H., Lee, J., Zhang, C., Janetanakit, W., Sant, V., Lu, T., Colburn, DA, Akkiraju, S. , Dossou, S., Cao, Y., Lee, KF, Varghese, S., Glinsky, G., Lal, R. Nanocuencos de sílice y oro con respuesta magnética para la entrega dirigida y la detección basada en SERS. (2016) Nanoescala. 8(23):11840-50. DOI: 10.1039/c6nr02445a

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Amin, ND, Bai, G., Klug, JR, Bonanomi, D., Pankratz, MT, Gifford, WD, Hinckley, CA, Sternfeld, MJ, Driscoll, SP, Dominguez, B., Lee, KF, Jin, X., Pfaff, SL La pérdida de microRNA-218 específico de motoneurona provoca insuficiencia neuromuscular sistémica. (2015) Ciencia. 350(6267):1525-9. DOI: 10.1126/ciencia.aad2509

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Izpisua Belmonte, JC, Callaway, EM, Caddick, SJ, Churchland, P., Feng, G., Homanics, GE, Lee, KF, Leopold, DA, Miller, CT, Mitchell, JF, Mitalipov, S., Moutri, AR, Movshon, JA, Okano, H., Reynolds, JH, Ringach, D., Sejnowski, TJ, Silva, AC, Strick, PL, Wu, J., Zhang, F. Cerebros, genes y primates. (2015) Neuron. 86(3):617-31. DOI: 10.1016/j.neurona.2015.03.021

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Vilar, M., Sung, TC, Chen, Z., García-Carpio, I., Fernandez, EM, Xu, J., Riek, R., Lee, KF La heterodimerización de p45-p75 modula la señalización de p75: base estructural y mecanismo de acción. (2014) PLOS Biología. 12(8):e1001918. DOI: 10.1371/journal.pbio.1001918

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Grande, MJ, Wetendorf, M., Lanz, RB, Hartig, SM, Creighton, CJ, Mancini, MA, Kovanci, E., Lee, KF, Threadgill, DW, Lydon, JP, Jeong, JW, DeMayo, FJ El receptor del factor de crecimiento epidérmico regula críticamente la función endometrial durante el embarazo temprano. (2014) Genética PLOS. 10(6):e1004451. DOI: 10.1371/journal.pgen.1004451

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La infertilidad y los resultados ginecológicos adversos, como la preeclampsia y el aborto espontáneo, representan importantes problemas de salud reproductiva femenina. La expresión espaciotemporal de los factores de crecimiento indica que juegan un papel importante en el embarazo. El objetivo de este estudio es definir el papel de la familia ERBB de receptores del factor de crecimiento en la función endometrial. Usando ablación condicional en ratones y siRNA en células estromales endometriales humanas primarias, identificamos que el receptor del factor de crecimiento epidérmico (Egfr) es fundamental para la función endometrial durante el embarazo temprano. Mientras que la ablación de Her2 o Erbb3 solo condujo a una modesta reducción en el tamaño de la camada, los ratones que carecen de expresión de Egfr son gravemente subfértiles. La muerte del embarazo se produjo poco después de la implantación del blastocisto debido a defectos en la decidualización, incluida la disminución de la proliferación, la supervivencia celular, la diferenciación y la expresión del gen diana. Para colocar a Egfr en una jerarquía reguladora genética, se usaron análisis de transcriptoma para comparar las firmas genéticas de ratones con ablación condicional de Egfr, sitio de integración 4 de MMTV relacionado con la falta de alas (Wnt4) o proteína morfogénica sin hueso 2 (Bmp2); revelando que Bmp2 y Wnt4 no solo son efectores clave aguas abajo de Egfr, sino que también regulan distintas funciones fisiológicas. En células primarias del estroma endometrial humano, se utilizó la expresión génica marcadora, un enfoque novedoso basado en imágenes de alto contenido y análisis de matriz de fosfocinasa para demostrar que el EGFR es un regulador crítico de la decidualización humana. Además, la inhibición de los intermediarios de señalización de EGFR WNK1 y AKT1S1, miembros identificados en la matriz de quinasas y que no se había informado anteriormente que desempeñaran un papel en el endometrio, también atenúan la decidualización. Estos resultados demuestran que EGFR juega un papel integral en el establecimiento del contexto celular necesario para un embarazo exitoso a través de la activación de intrincadas redes transcripcionales y de señalización, lo que proporciona información valiosa sobre posibles objetivos terapéuticos.

Sung, TC, Chen, Z., Thuret, S., Vilar, M., Gage, FH, Riek, R., Lee, KF P45 forma un complejo con FADD y promueve la supervivencia de las células neuronales después de una lesión de la médula espinal. (2013) Más uno. 8(7):e69286. DOI: 10.1371/journal.pone.0069286

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Seidel, S., Bruce, J., Leblanc, M., Lee, KF, Fan, H., Ahlquist, P., Young, JA Los ratones knockout para ZASC1 exhiben un defecto temprano específico de la médula ósea en la replicación del virus de la leucemia murina. (2013) Revista de Virología. 10:130. DOI: 10.1186/1743-422X-10-130

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Wei, PC, Hsieh, YH, Su, MI, Jiang, X., Hsu, PH, Lo, WT, Weng, JY, Jeng, YM, Wang, JM, Chen, PL, Chang, YC, Lee, KF, Tsai, MD, Shew, JY, Lee, WH La pérdida del sensor de estrés oxidativo NPGPx compromete la actividad de la chaperona GRP78 e induce una enfermedad sistémica. (2012) célula molecular. 48(5):747-59. DOI: 10.1016/j.molcel.2012.10.007

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Morello, CS, Kraynyak, KA, Levinson, MS, Chen, Z., Lee, KF, Spector, DH El HSV-2 inactivado en MPL/adyuvante de alumbre brinda una protección casi completa contra la infección genital y la excreción después de un desafío y un nuevo desafío a largo plazo. (2012) Vacuna. 30(46):6541-6550. DOI: 10.1016/j.vacuna.2012.08.049

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La infección por el virus del herpes simple tipo 2 (HSV-2) puede provocar una enfermedad genital recurrente de por vida, excreción asintomática del virus y transmisión. Ninguna vacuna hasta la fecha ha mostrado una protección clínica significativa. Aquí, utilizamos un modelo de ratón de infección genital por HSV-2 para probar la eficacia de una vacuna que consiste en HSV-2 inactivado con formalina (FI-HSV2) completo formulado con monofosforil lípido A (MPL) y adyuvantes de alumbre. Los componentes de la vacuna se administraron solos o como inmunización de refuerzo principal junto con vacunas de ADN que codifican una glicoproteína D2 truncada (gD2t) y dos genes conservados de HSV-2 necesarios para la replicación del virus, UL5 (ADN helicasa) y UL30 (ADN polimerasa). Nuestros resultados muestran: (1) en comparación con controles inmunizados simulados, los ratones inmunizados con FI-HSV2 más MPL/alumbre mostraron protección contra la carga de la enfermedad y la excreción viral total, mientras que los ratones inmunizados con proteína gD2t con MPL/alumbre no lo hicieron; (2) la protección contra la enfermedad genital y la replicación viral se correlacionó con el tipo de refuerzo en una inmunización de refuerzo primario con poca ventaja proporcionada por un refuerzo de ADN; (3) la inmunización intramuscular (im) con FI-HSV2 en MPL/Alhydrogel adyuvante proporcionó una protección casi completa contra la excreción vaginal de HSV-2 después de una exposición letal intravaginal (i.vag.) a corto plazo y una nueva exposición a largo plazo; (4) la inmunización de formulación única con vacunas de ADN, FI-HSV2 y MPL en un adyuvante de fosfato de aluminio (Adju-Phos) no aumentó la protección en relación con FI-HSV2/MPL/Adju-Phos solo; y (5) se requirió la adición de MPL/alumbre al FI-HSV2 para una protección óptima contra la enfermedad, la replicación viral y la carga de virus latente en los ganglios de la raíz dorsal (DRG). En particular, una formulación de vacuna optimizada de FI-HSV2 MPL/Alhydrogel administrada im completamente protegida contra la excreción vaginal detectable de HSV-2 en la mayoría de los animales y el ADN latente de HSV-2 en el GRD de todos los animales.

Montminy, M., Lee, KF, Rivier, JE, Rivier, C., Reichlin, S. Wylie Vale: maestro neuroendocrino. (2012) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 109(10):3604-5. DOI: 10.1073/pnas.1201696109

Yang, J., Domínguez, B., de Winter, F., Gould, TW, Eriksson, JE, Lee, KF Nestin regula negativamente la diferenciación postsináptica de la sinapsis neuromuscular. (2011) Neurociencia de la naturaleza. 14(3):324-30. DOI: 10.1038/nn.2747

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An, MC, Lin, W., Yang, J., Dominguez, B., Padgett, D., Sugiura, Y., Aryal, P., Gould, TW, Oppenheim, RW, Hester, ME, Kaspar, BK, Ko, CP, Lee, KF La acetilcolina regula negativamente el desarrollo de la unión neuromuscular a través de distintos mecanismos celulares. (2010) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 107(23):10702-7. DOI: 10.1073/pnas.1004956107

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Bengoechea, TG, Chen, Z., O'Leary, DA, O'Leary, D., Masliah, E., Lee, KF p75 reduce los déficits de inervación simpática inducidos por beta-amiloide en un modelo de ratón con enfermedad de Alzheimer. (2009) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 106(19):7870-5. DOI: 10.1073/pnas.0901533106

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Lim, YS, McLaughlin, T., Sung, TC, Santiago, A., Lee, KF, O'Leary, DD p75 (NTR) media la señalización inversa de ephrin-A requerida para la repulsión y el mapeo de axones. (2008) Neuron. 59(5):746-58. DOI: 10.1016/j.neurona.2008.07.032

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Wang, W., Takimoto, JK, Louie, GV, Baiga, TJ, Noel, JP, Lee, KF, Slesinger, Pensilvania, Wang, L. Codificación genética de aminoácidos no naturales para estudios celulares y neuronales. (2007) Neurociencia de la naturaleza. 10(8):1063-72. DOI: 10.1038/nn1932

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Rissman, RA, Lee, KF, Vale, W., Sawchenko, PE Los receptores del factor liberador de corticotropina regulan diferencialmente la fosforilación de tau inducida por el estrés. (2007) Journal of Neuroscience. 27(24):6552-62. DOI: 10.1523/JNEUROSCI.5173-06.2007

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Li, C., Chen, P., Vaughan, J., Lee, KF, Vale, W. La urocortina 3 regula la secreción de insulina estimulada por la glucosa y la homeostasis energética. (2007) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 104(10):4206-11. DOI: 10.1073/pnas.0611641104

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La urocortina 3 (Ucn 3), un miembro de la familia de péptidos del factor liberador de corticotropina (CRF), se expresa fuertemente en las células beta pancreáticas de mamíferos y se ha demostrado que estimula la secreción de insulina. Aquí informamos la investigación de la hipótesis de que la Ucn 3 endógena regula la secreción de insulina, particularmente en presencia de exceso de nutrientes. La secreción de inmunorreactividad similar a Ucn 3 de células beta cultivadas fue estimulada por secretagogos de insulina y glucosa altos tales como GLP-1; además, los niveles de ARNm de 5 Ucn 3 pancreáticos in vivo aumentaron durante el balance energético positivo causado por la dieta rica en grasas y por la ausencia de leptina. La inmunoneutralización de Ucn 3 o el bloqueo farmacológico de su receptor, el receptor CRF tipo 2 (CRFR2), atenuaron la secreción de insulina inducida por glucosa alta pero no baja de islotes aislados in vitro. Los islotes cultivados aislados de ratones nulos Ucn 3 también secretaron menos insulina en respuesta a altas concentraciones de glucosa. De forma consistente, la inyección periférica de un antagonista selectivo de CRFR2 antes de la administración de una provocación con glucosa atenuó significativamente la secreción de insulina inducida por glucosa in vivo. Los ratones nulos Ucn 3 estaban relativamente protegidos de la hiperinsulinemia, la hiperglucemia, la intolerancia a la glucosa, la esteatosis hepática y la hipertrigliceridemia inducidas por una dieta rica en grasas. Además, encontramos que los ratones nulos Ucn 3 envejecidos mantuvieron una mejor tolerancia a la glucosa que los compañeros de camada de tipo salvaje de la misma edad. Estos resultados sugieren que la Ucn 3 endógena en el páncreas se induce en condiciones calóricas excesivas y actúa localmente para aumentar la producción de insulina, lo que a largo plazo puede contribuir a reducir la sensibilidad a la insulina y tener consecuencias metabólicas perjudiciales.

Chen, A., Brar, B., Choi, CS, Rousso, D., Vaughan, J., Kuperman, Y., Kim, SN, Donaldson, C., Smith, SM, Jamieson, P., Li, C ., Nagy, TR, Shulman, GI, Lee, KF, Vale, W. La urocortina 2 modula la utilización de la glucosa y la sensibilidad a la insulina en el músculo esquelético. (2006) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 103(44):16580-5. DOI: 10.1073/pnas.0607337103

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El músculo esquelético es el principal tejido responsable de la eliminación de glucosa estimulada por insulina y es un sitio importante de resistencia periférica a la insulina. La urocortina 2 (Ucn 2), un miembro de la familia del factor liberador de corticotropina (CRF), y su receptor CRF tipo 2 afín (CRFR2) se expresan en gran medida en el músculo esquelético. Para determinar el papel fisiológico de Ucn 2, generamos ratones deficientes en este péptido. Usando pruebas de tolerancia a la glucosa (GTT), pruebas de tolerancia a la insulina (ITT) y estudios de abrazadera de glucosa euglucémica hiperinsulinémica, demostramos que los ratones que carecían de Ucn 2 exhibieron una mayor sensibilidad a la insulina y estaban protegidos contra la resistencia a la insulina inducida por grasa. La administración de Ucn 2 sintético a ratones mutantes antes de que los GTT y los ITT restauraran la glucosa en sangre a los niveles de WT. La administración de un antagonista selectivo de CRFR2 a ratones WT dio como resultado un perfil de GTT que reflejaba el de ratones nulos Ucn 2. Las mediciones de la composición corporal de ratones nulos Ucn 2 con una dieta alta en grasas demostraron disminuciones en la grasa y aumentos en el tejido magro en comparación con los ratones WT. Proponemos que los ratones mutantes nulos muestren una mayor captación de glucosa en el músculo esquelético a través de la eliminación de la inhibición de la señalización de insulina mediada por Ucn 2. De acuerdo con estos datos, Ucn 2 inhibió la fosforilación de Akt y ERK1/2 inducida por insulina en células de músculo esquelético cultivadas y miotubos C2C12. Estos datos son consistentes con la hipótesis de que Ucn 2 funciona como un regulador negativo local de la captación de glucosa en el músculo esquelético y fomenta la exploración de la posibilidad de que la supresión de la vía Ucn 2/CRFR2 pueda brindar beneficios en estados resistentes a la insulina, como la diabetes tipo 2. .

Negro, A., Brar, BK, Gu, Y., Peterson, KL, Vale, W., Lee, KF Se requiere erbB2 para la señalización del receptor acoplado a proteína G en el corazón. (2006) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 103(43):15889-93. DOI: 10.1073/pnas.0607499103

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Chen, A., Zorrilla, E., Smith, S., Rousso, D., Levy, C., Vaughan, J., Donaldson, C., Roberts, A., Lee, KF, Vale, W. Los ratones deficientes en urocortina 2 exhiben alteraciones específicas de género en el eje hipotálamo-pituitario-suprarrenal circadiano y un comportamiento similar al depresivo. (2006) Journal of Neuroscience. 26(20):5500-10. DOI: 10.1523/JNEUROSCI.3955-05.2006

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Morris, JK, Maklad, A., Hansen, LA, Feng, F., Sorensen, C., Lee, KF, Macklin, WB, Fritzsch, B. Persiste una inervación desorganizada del oído interno en ausencia de ErbB2. (2006) Investigación del cerebro. 1091(1):186-99. DOI: 10.1016/j.brainres.2006.02.090

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La proteína ErbB2 es esencial para el desarrollo de las células de Schwann y para el crecimiento normal de las fibras y la formación de mielina de los nervios periféricos. Hemos investigado el destino de las neuronas sensoriales del oído interno derivadas de otoquistes en ausencia de ErbB2 usando mutantes nulos de ErbB2. La inervación aferente del epitelio sensorial del oído muestra numerosas fibras que sobrepasan el órgano de Corti, seguidas de una reducción de esas fibras en los embriones casi a término. Esto sugiere que las células de Schwann maduras no desempeñan un papel en la orientación o el mantenimiento de la inervación del oído interno. Similar al exceso de las fibras nerviosas, las neuronas sensoriales migran más allá de sus ubicaciones normales hacia posiciones inusuales en el modiolo. Pueden pasar por alto una señal de parada proporcionada por las células de Schwann que están ausentes como se revela con una histología detallada. La reducción de los aferentes que se exceden puede mejorarse mediante una reducción de la transcripción de neurotrofina Ntf3 a aproximadamente el 25% del tipo salvaje. Las reducciones de la transcripción de Ntf3 son comparables a un modelo adulto que usa una forma negativa dominante de ErbB4 expresada en las células de soporte y las células de Schwann del órgano de Corti. Los ratones nulos ErbB2 retienen aferentes a las células ciliadas internas posiblemente debido a la expresión prominente de la neurotrofina Bdnf en las células ciliadas en desarrollo. A pesar de la presencia normal de la transcripción de Bdnf, las fibras aferentes están desorientadas cerca del órgano de Corti. Las fibras eferentes no forman un haz espiral intraganglionar en ausencia de ganglios espirales y parecen reducidas y desorganizadas. Esto sugiere que las alteraciones mediadas por ErbB2 en las neuronas sensoriales o la ausencia de células de Schwann afectan el crecimiento de las fibras eferentes al órgano de Corti.

Lin, W., Domínguez, B., Yang, J., Aryal, P., Brandon, EP, Gage, FH, Lee, KF El neurotransmisor acetilcolina regula negativamente la formación de sinapsis neuromuscular mediante un mecanismo dependiente de Cdk5. (2005) Neuron. 46(4):569-79. DOI: 10.1016/j.neurona.2005.04.002

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Myers, CP, Lewcock, JW, Hanson, MG, Gosgnach, S., Aimone, JB, Gage, FH, Lee, KF, Landmesser, LT, Pfaff, SL Se requiere entrada colinérgica durante el desarrollo embrionario para mediar en el ensamblaje adecuado de los circuitos locomotores espinales. (2005) Neuron. 46(1):37-49. DOI: 10.1016/j.neurona.2005.02.022

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Wang, P., Yang, G., Mosier, DR, Chang, P., Zaidi, T., Gong, YD, Zhao, NM, Dominguez, B., Lee, KF, Gan, WB, Zheng, H. Sinapsis neuromusculares defectuosas en ratones que carecen de proteína precursora de amiloide (APP) y proteína similar a APP 2. (2005) Journal of Neuroscience. 25(5):1219-25. DOI: 10.1523/JNEUROSCI.4660-04.2005

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Jackson-Fisher, AJ, Bellinger, G., Ramabhadran, R., Morris, JK, Lee, KF, Popa, DF Se requiere ErbB2 para la morfogénesis ductal de la glándula mamaria. (2004) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 101(49):17138-43. DOI: 10.1073/pnas.0407057101

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Joseph, NM, Mukouyama, YS, Mosher, JT, Jaegle, M., Crone, SA, Dormand, EL, Lee, KF, Meijer, D., Anderson, DJ, Morrison, SJ Las células madre de la cresta neural experimentan una diferenciación multilinaje en el desarrollo de los nervios periféricos para generar fibroblastos endoneurales además de las células de Schwann. (2004) Desarrollo. 131(22):5599-612. DOI: 10.1242/desv.01429

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Negro, A., Brar, BK, Lee, KF Funciones esenciales de Her2/erbB2 en el desarrollo y la función cardiacos. (2004) Avances recientes en la investigación hormonal. 59: 1-12.

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El receptor de tirosina quinasa erbB2, también conocido en humanos como Her2, es un miembro de la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR o erbB1), que también incluye erbB3 y erbB4. Los erbB se descubrieron en un virus tumoral de eritroblastosis aviar y exhibieron similitudes con el EGFR humano (Yarden y Sliwkowski, 2001). Her2/erbB2 se expresa en gran medida en muchos tipos de cáncer. Su sobreexpresión se correlaciona con un mal pronóstico para pacientes con cáncer de mama y de ovario. Los receptores ErbB se unen a una familia de factores de crecimiento, denominados neuregulinas/heregulina (NRG/HRG), que comprenden NRG-1, -2, -3 y -4 e incluyen múltiples isoformas. ErbB2/Her2 es un receptor huérfano que no se une al ligando solo sino que se heterodimeriza con los otros receptores erbB para la señalización de NRG. ErbB2 se expresa en múltiples tejidos neuronales y no neuronales en embriones y animales adultos, incluido el corazón. Los datos genéticos demostraron que se requiere erbB2 para el desarrollo embrionario normal de las neuronas sensoriales craneales derivadas de la cresta neural. Los embriones mutantes ErbB2/Her2-null de un defecto de trabeculación mueren antes del día embrionario (E) 11. Para estudiar su papel en etapas posteriores del desarrollo, generamos una línea de ratón transgénico que expresa específicamente el ADNc de erbB2 de rata en el corazón bajo el control de el promotor de cadena pesada de alfa-miosina específico del corazón. Cuando se cruzó con el fondo nulo, la expresión del ADNc de erbB2 de rata rescató el fenotipo cardíaco en los ratones mutantes erbB2 nulos que sobreviven hasta el nacimiento pero muestran una ausencia de células de Schwann y una pérdida severa de neuronas sensoriales motoras y espinales. Para estudiar el papel de erbB2 en el corazón adulto, generamos ratones mutantes condicionales que portaban una deleción de erbB2 restringida al corazón. Estos mutantes condicionales de erbB2 exhibieron múltiples parámetros independientes de miocardiopatía dilatada, incluida la dilatación de la cámara, el adelgazamiento de la pared y la disminución de la contractilidad. Curiosamente, el tratamiento de los cánceres de mama que sobreexpresan erbB2 con Herceptin (Trastuzumab), un anticuerpo monoclonal humanizado específico para el dominio extracelular de erbB2, hace que algunos pacientes desarrollen disfunción cardíaca. El efecto adverso aumenta significativamente en aquellos pacientes que también reciben el agente quimioterapéutico antraciclina. Encontramos que los miocitos cardíacos deficientes en erbB2 son más susceptibles a la citotoxicidad inducida por antraciclina. Estos resultados sugieren que la señalización de erbB2 en el corazón es esencial para la prevención de la miocardiopatía dilatada. Estas líneas de ratones proporcionan modelos con los que dilucidar los mecanismos moleculares y celulares mediante los cuales la señalización de erbB2 regula las funciones cardíacas. Estos ratones también proporcionarán información importante para diseñar estrategias que mitiguen los efectos cardiotóxicos del tratamiento con Herceptin, lo que permitirá ampliar el uso potencial de este fármaco para tratar todos los cánceres que sobreexpresan erbB2.

Lin, Carolina del Sur, Lee, KF, Nikitin, AY, Hilsenbeck, SG, Cardiff, RD, Li, A., Kang, KW, Frank, SA, Lee, WH, Lee, EY La mutación somática de p53 conduce a tumores mamarios de ratón positivos y negativos para el receptor de estrógeno alfa con alta frecuencia de metástasis. (2004) Investigación sobre el cáncer. 64(10):3525-32. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-03-3524

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Bale, TL, Hoshijima, M., Gu, Y., Dalton, N., Anderson, KR, Lee, KF, Rivier, J., Chien, KR, Vale, WW, Peterson, KL Las acciones fisiológicas cardiovasculares de la urocortina II: efectos agudos en la insuficiencia cardíaca murina. (2004) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 101(10):3697-702. DOI: 10.1073/pnas.0307324101

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El factor liberador de corticotropina (CRF) y sus parálogos, la urocortina (Ucn) I, -II y -III, activan sus receptores, los receptores CRF (CRFR) 1 y -2, para mantener la homeostasis a través de respuestas endocrinas, autonómicas y conductuales. CRFR2 se encuentra en cardiomiocitos y en células endoteliales y de músculo liso de la vasculatura sistémica. Se usaron ecocardiografía y cateterismo cardíaco en ratones para evaluar los efectos fisiológicos de la deficiencia de UcnII y CRFR2 iv en la función ventricular izquierda y la vasculatura sistémica. El tratamiento con UcnII aumentó la frecuencia cardíaca, exhibió potentes acciones inotrópicas y lusitrópicas en el ventrículo izquierdo e indujo un cambio hacia abajo de la relación presión-volumen diastólica. UcnII también redujo la presión arterial sistémica, asociada con una disminución de la elastancia arterial sistémica (presión sistólica final/volumen sistólico) y la resistencia vascular sistémica. Los ratones con deficiencia de CRFR2 no mostraron alteración en la contractilidad cardíaca o la presión arterial en respuesta a la administración de UcnII, lo que sugiere que los efectos de UcnII son específicos de la función de CRFR2. El pretratamiento con un antagonista de los receptores beta-adrenérgicos, esmalol, no tuvo efecto sobre los efectos inotrópicos o lusitrópicos de UcnII in vivo, lo que indica que sus acciones son independientes de los receptores beta-adrenérgicos. La administración de un bolo iv único de UcnII a un modelo de insuficiencia cardíaca (ratones con deficiencia de proteína LIM específica de músculo) produjo una mejora significativa de los efectos inotrópicos y lusitrópicos en la función ventricular izquierda y mejoró el gasto cardíaco. Estos resultados demuestran las potentes acciones fisiológicas cardiovasculares de UcnII tanto en ratones de tipo salvaje como cardiomiopáticos y respaldan un posible uso beneficioso de este péptido en la terapia de la insuficiencia cardíaca congestiva.

Brar, BK, Jonassen, AK, Egorina, EM, Chen, A., Negro, A., Perrin, MH, Mjøs, OD, Latchman, DS, Lee, KF, Vale, W. La urocortina-II y la urocortina-III son cardioprotectoras contra la lesión por reperfusión de isquemia: un papel cardioprotector endógeno esencial para el receptor del factor liberador de corticotropina tipo 2 en el murino (2004) Endocrinología. 145(1):24-35; discusión 21-3. DOI: 10.1210/en.2003-0689

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El receptor del factor liberador de corticotropina (CRF) tipo 2beta (CRFR2beta) se expresa en el corazón. La activación de urocortina (Ucn)-I de CRFR2beta es cardioprotectora contra la lesión por reperfusión isquémica (I/R) mediante la estimulación de ERKs1/2 p42, 44. Sin embargo, al unirse al receptor CRF tipo 1, Ucn-I también puede activar el eje de estrés hipotalámico. . El péptido relacionado con Ucn-II/stresscopin y Ucn-III/stresscopin son dos nuevos miembros de la familia de genes CRF/Ucn-I y son selectivos para CRFR2beta. Proponemos que CRFR2beta selectivo Ucn-II o Ucn-III protegerá a los cardiomiocitos y al corazón de rata perfundido con Langendorff ex vivo de la lesión por I/R mediante la activación de ERK1/2-p42, 44. Ucn-II se expresa en cardiomiocitos de ratón, y Ucn -II o Ucn-III pueden unirse a CRFR2beta, lo que resulta en la fosforilación de ERK1/2-p42, p-44 y estimulación de AMPc. La fosforilación de ERK1/2-p42, p-44 está regulada por la vía de la quinasa Ras/Raf-1, independiente de la adenilato ciclasa y, por lo tanto, de la activación del AMPc. Ucn-II y Ucn-III protegen a los cardiomiocitos de la lesión por I/R y reducen el porcentaje de tamaño del infarto: relación de riesgo en corazones de rata perfundidos de Langendorff expuestos a I/R regional (P<0.001). El antagonista selectivo de CRFR2 astressin2-B y un inhibidor de ERK1/2-p42, 44 suprimen las acciones cardioprotectoras de Ucn-II y Ucn-III en reperfusión. Los cardiomiocitos aislados de ratones sin CRFR2 son menos resistentes a la lesión por I/R, en comparación con los cardiomiocitos de tipo salvaje. Proponemos el uso de agonistas selectivos de CRFR2, Ucn-II y Ucn-III, para tratar la cardiopatía isquémica debido a sus potentes efectos cardioprotectores en el corazón murino y su impacto mínimo en el eje de estrés hipotalámico. Hacemos hincapié en un importante papel cardioprotector endógeno para CRFR2beta en el corazón murino.

Bale, TL, Anderson, KR, Roberts, AJ, Lee, KF, Nagy, TR, Valle, WW Los ratones deficientes en el receptor 2 del factor liberador de corticotropina muestran respuestas homeostáticas anormales a los desafíos del aumento de la grasa en la dieta y el frío. (2003) Endocrinología. 144(6):2580-7. DOI: 10.1210/en.2002-0091

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El factor liberador de corticotropina (CRF) y su familia de ligandos son reguladores clave del balance energético. Estos ligandos funcionan mediante la activación de sus dos receptores, CRFR1 y CRFR2. Se ha demostrado que CRFR1 es el receptor dominante en la activación del eje hipotálamo-pituitario-suprarrenal en respuesta al estrés, así como un mediador clave de la ansiedad en el sistema límbico. Para examinar específicamente el papel de CRFR2 en el equilibrio energético, los ratones deficientes en CRFR2 fueron expuestos a perturbaciones fisiológicas de la homeostasis, incluida una dieta alta en grasas, estrés por frío repetido y desafíos de glucosa e insulina, y se midieron sus respuestas. Mientras seguían una dieta rica en grasas, los ratones mutantes en CRFR2 consumieron sustancialmente más alimentos y mantuvieron el mismo peso, pero tenían una cantidad significativamente menor de grasa corporal y menos lípidos en plasma que sus compañeros de camada de tipo salvaje. Estos ratones también eran menos propensos a desarrollar resistencia a la insulina inducida por la dieta y más sensibles a los cambios en la glucosa plasmática, lo que indica una mayor sensibilidad a la insulina. Después del estrés por frío repetido, los ratones mutantes tenían una grasa corporal significativamente menor y una reducción transitoria en la eficiencia alimenticia, a pesar de pesos corporales similares, lo que sugiere una posible preferencia por la grasa como sustrato energético. Los niveles elevados de proteína de desacoplamiento-1 en el tejido adiposo marrón, así como los adipocitos blancos y marrones más pequeños de ratones mutantes CRFR2, fueron indicaciones de un posible aumento del tono simpático. Estos resultados demuestran que CRFR2 juega un papel fundamental en la regulación del gasto de energía y es importante para las respuestas a los desafíos homeostáticos.

Zhao, X., Ueba, T., Christie, BR, Barkho, B., McConnell, MJ, Nakashima, K., Lein, ES, Eadie, BD, Willhoite, AR, Muotri, AR, Summers, RG, Chun, j, Lee, KF, calibre, FH Los ratones que carecen de proteína 1 de unión a metil-CpG tienen déficits en la neurogénesis adulta y la función del hipocampo. (2003) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 100(11):6777-82. DOI: 10.1073/pnas.1131928100

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Brandon, EP, Lin, W., D'Amour, KA, Pizzo, DP, Dominguez, B., Sugiura, Y., Thode, S., Ko, CP, Thal, LJ, Gage, FH, Lee, KF Patrón aberrante de sinapsis neuromusculares en ratones deficientes en colina acetiltransferasa. (2003) Journal of Neuroscience. 23 (2): 539 49-.

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Crone, SA, Negro, A., Trumpp, A., Giovannini, M., Lee, KF La expresión epitelial colónica de ErbB2 es necesaria para el mantenimiento posnatal del sistema nervioso entérico. (2003) Neuron. 37 (1): 29 40-.

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Crone, SA, Lee, KF El límite que lidera el límite: los receptores derivados del objetivo actúan como señales de orientación. (2002) Neuron. 36 (3): 333 5-.

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Crone, SA, Lee, KF La selección de genes revela múltiples funciones esenciales del sistema de señalización de neurregulina durante el desarrollo de los sistemas neuroendocrino y nervioso. (2002) Ann. NY Acad. Ciencia. 971: 547-53.

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Vetter, DE, Li, C., Zhao, L., Contarino, A., Liberman, MC, Smith, GW, Marchuk, Y., Koob, GF, Heinemann, SF, Vale, W., Lee, KF Los ratones con deficiencia de urocortina muestran problemas de audición y un aumento del comportamiento similar a la ansiedad. (2002) Genética de la naturaleza. 31(4):363-9. DOI: 10.1038/ng914

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Bale, TL, Lee, KF, Vale, WW El papel de los receptores del factor liberador de corticotropina en el estrés y la ansiedad. (2002) Biología Integrativa y Comparada. 42(3):552-5. DOI: 10.1093/icb/42.3.552

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Bale, TL, Giordano, FJ, Hickey, RP, Huang, Y., Nath, AK, Peterson, KL, Vale, WW, Lee, KF El receptor 2 del factor liberador de corticotropina es un supresor tónico de la vascularización. (2002) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 99(11):7734-9. DOI: 10.1073/pnas.102187099

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La angiogénesis se regula mediante un equilibrio entre activadores e inhibidores. Sin embargo, se sabe poco sobre la regulación del estado de reposo de los vasos adultos. El receptor 2 del factor liberador de corticotropina (CRFR2) se encuentra tanto en las células endoteliales como en las del músculo liso (SMC) en la vasculatura, donde su función sigue siendo difícil de alcanzar. Hemos investigado el papel de CRFR2 como determinante de la vascularización tisular comparando ratones de control y deficientes en CRFR2 con técnicas inmunohistológicas y morfométricas. Para definir los mecanismos responsables de la inhibición de la angiogénesis por CRFR2, también hemos examinado in vitro el efecto de la activación del ligando sobre la proliferación celular, la fosforilación de proteínas del ciclo celular y la formación de tubos capilares. Nuestros resultados demuestran que los ratones deficientes en CRFR2 se hipervascularizan después del nacimiento. La activación de este receptor in vitro da como resultado una liberación reducida del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) de las SMC, una inhibición de la proliferación de SMC y una inhibición de la formación de tubos capilares en geles de colágeno. El tratamiento de una matriz de gel inyectada por vía subcutánea con un agonista de CRFR2 inhibe la vascularización inducida por el factor de crecimiento. Las transferencias Western muestran que la proteína del retinoblastoma del ciclo celular, que es esencial para la progresión del ciclo celular, disminuye con el tratamiento con agonistas de CRFR2 en SMC. Estos resultados sugieren que CRFR2 es un componente crítico de una vía necesaria para la inhibición tónica de la neovascularización en adultos. CRFR2 puede ser un objetivo potencial para la modulación terapéutica de la angiogénesis en el cáncer y la enfermedad cardiovascular isquémica.

Crone, SA, Zhao, YY, Fan, L., Gu, Y., Minamisawa, S., Liu, Y., Peterson, KL, Chen, J., Kahn, R., Condorelli, G., Ross, J ., Chien, KR, Lee, KF ErbB2 es esencial en la prevención de la miocardiopatía dilatada. (2002) Nature Medicine. 8(5):459-65. DOI: 10.1038/nm0502-459

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Kaspar, BK, Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, EP, Schaffer, D., Verma, IM, Lee, KF, Heinemann, SF, Gage, FH El virus adenoasociado media eficazmente la modificación genética condicional en el cerebro. (2002) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 99(4):2320-5. DOI: 10.1073/pnas.042678699

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Bale, TL, Picetti, R., Contarino, A., Koob, GF, Vale, WW, Lee, KF Los ratones deficientes tanto para el receptor 1 del factor liberador de corticotropina (CRFR1) como para CRFR2 tienen una respuesta de estrés alterada y muestran un comportamiento similar a la ansiedad sexualmente dicotómico. (2002) Journal of Neuroscience. 22 (1): 193 9-.

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El factor liberador de corticotropina (CRF) y su familia de péptidos son coordinadores críticos de la homeostasis cuyas acciones están mediadas por sus receptores, el receptor 1 de CRF (CRFR1) y CRFR2, que se encuentran en todo el SNC y la periferia. Los fenotipos de ratones deficientes en CRFR1 o CRFR2 demuestran el papel fundamental que desempeñan estos receptores. Los ratones mutantes en CRFR1 tienen una respuesta de estrés alterada y muestran un comportamiento similar a la ansiedad disminuido, mientras que los ratones mutantes en CRFR2 son hipersensibles al estrés y muestran un comportamiento similar a la ansiedad aumentado. Para dilucidar aún más las funciones de ambos receptores CRF y determinar su interacción en los comportamientos, hemos generado ratones deficientes en CRFR1 y CRFR2. El fenotipo conductual de estos ratones demuestra un papel novedoso del genotipo de la madre en el desarrollo de la ansiedad de las crías. Hemos encontrado que aunque los ratones hembra doblemente mutantes muestran un comportamiento similar al ansiolítico, los ratones machos doblemente mutantes muestran un comportamiento significativamente más similar a la ansiedad en comparación con las hembras. También hemos determinado que el genotipo CRFR2 de la madre afecta el comportamiento similar a la ansiedad de los ratones macho, de modo que un cachorro nacido de una madre heterocigota o mutante muestra un comportamiento significativamente más similar a la ansiedad, independientemente del genotipo de ese cachorro. Los ratones con doble mutación también muestran un deterioro aún mayor de su eje hipotálamo-pituitario-suprarrenal en respuesta al estrés que la de los ratones con mutación CRFR1. Los niveles de ARNm de CRF están elevados en ratones con mutación doble y CRFR1, y los niveles de ARNm de vasopresina y urocortina III aumentan en ratones con mutación doble y CRFR2. Estos resultados indican que tanto CRFR1 como CRFR2 tienen funciones críticas en la regulación génica y el mantenimiento de la homeostasis en respuesta al estrés.

Lin, W., Burgess, RW, Domínguez, B., Pfaff, SL, Sanes, JR, Lee, KF Papeles distintos de nervio y músculo en la diferenciación postsináptica de la sinapsis neuromuscular. (2001) Naturaleza. 410 (6832): 1057-64. DOI: 10.1038/35074025

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Lee, S., Smith, GW, Vale, W., Lee, KF, Río, C. Los ratones que carecen de los receptores del factor liberador de corticotropina (CRF) tipo 1 muestran una respuesta de ACTH embotada al alcohol agudo a pesar de la expresión del gen CRF hipotalámico constitutivo regulado al alza. (2001) Alcohol. Clinica Exp. Res. 25 (3): 427 33-.

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Bentley, California, Lee, KF p75 es importante para el crecimiento de axones y la migración de células de Schwann durante el desarrollo. (2000) Journal of Neuroscience. 20 (20): 7706 15-.

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Bradbury, MJ, McBurnie, MI, Denton, DA, Lee, KF, Vale, WW Modulación de la hipofagia inducida por urocortina y pérdida de peso por deficiencia del receptor 1 del factor liberador de corticotropina en ratones. (2000) Endocrinología. 141(8):2715-24. DOI: 10.1210/endo.141.8.7606

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Syroid, DE, Maycox, PJ, Soilu-Hänninen, M., Petratos, S., Bucci, T., Burrola, P., Murray, S., Cheema, S., Lee, KF, Lemke, G., Kilpatrick, TJ Inducción de la muerte de células de Schwann postnatal por el receptor de neurotrofina de baja afinidad in vitro y después de la axotomía. (2000) Journal of Neuroscience. 20 (15): 5741 7-.

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Contarino, A., Dellu, F., Koob, GF, Smith, GW, Lee, KF, Vale, WW, Oro, LH Disociación de la activación locomotora y supresión de la ingesta de alimentos inducida por CRF en ratones deficientes en CRFR1. (2000) Endocrinología. 141(7):2698-702. DOI: 10.1210/endo.141.7.7653

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Bale, TL, Contarino, A., Smith, GW, Chan, R., Gold, LH, Sawchenko, PE, Koob, GF, Vale, WW, Lee, KF Los ratones deficientes en el receptor 2 de la hormona liberadora de corticotropina muestran un comportamiento similar al de la ansiedad y son hipersensibles al estrés. (2000) Genética de la naturaleza. 24 (4): 410-4. DOI: 10.1038/74263

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Lin, W., Sánchez, HB, Deerinck, T., Morris, JK, Ellisman, M., Lee, KF Desarrollo aberrante de axones motores y sinapsis neuromusculares en ratones deficientes en erbB2. (2000) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 97 (3): 1299 304-.

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Blume-Jensen, P., Jiang, G., Hyman, R., Lee, KF, O'Gorman, S., Hunter, T. La activación de la fosfatidilinositol 3'-quinasa inducida por el receptor del factor de células madre/Kit es esencial para la fertilidad masculina. (2000) Genética de la naturaleza. 24 (2): 157-62. DOI: 10.1038/72814

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Morris, JK, Lin, W., Hauser, C., Marchuk, Y., Getman, D., Lee, KF El rescate del defecto cardíaco en ratones mutantes ErbB2 revela funciones esenciales de ErbB2 en el desarrollo del sistema nervioso periférico. (1999) Neuron. 23 (2): 273 83-.

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Li, Q., Lu, Q., Hwang, JY, Büscher, D., Lee, KF, Izpisúa-Belmonte, JC, Verma, IM Los ratones deficientes en IKK1 exhiben un desarrollo anormal de la piel y el esqueleto. (1999) Genes y desarrollo. 13 (10): 1322 8-.

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Li, Q., Van Antwerp, D., Mercurio, F., Lee, KF, Verma, MI Degeneración hepática grave en ratones que carecen del gen de la cinasa 2 de IkappaB. (1999) Ciencia. 284 (5412): 321 5-.

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Turnbull, AV, Smith, GW, Lee, S., Vale, WW, Lee, KF, Río, C. Los ratones deficientes en el receptor CRF tipo I exhiben una respuesta hipófisis-suprarrenal pronunciada a la inflamación local. (1999) Endocrinología. 140(2):1013-7. DOI: 10.1210/endo.140.2.6675

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Estudios recientes indican que la regulación de la secreción de adrenocorticotropina (ACTH) por el factor liberador de corticotropina (CRF) está mediada predominantemente por el receptor de CRF tipo I (CRF-R1). De hecho, los ratones deficientes en CRF-R1 (CRF-R1 -/-) muestran un marcado deterioro del eje pituitario-suprarrenal. Sin embargo, las concentraciones de ACTH en plasma de ratones CRF-R1 -/- no estresados son similares a las de los ratones de tipo salvaje. Mostramos aquí que la arginina vasopresina (AVP) es un importante secretagogo de ACTH en ratones CRF-R1 -/- en condiciones de reposo, ya que la administración de suero anti-AVP, pero no suero anti-CRF, redujo notablemente (en un 60%) el plasma en reposo. concentraciones de ACTH en estos mutantes. También investigamos la respuesta pituitaria-suprarrenal a la inflamación local inducida por trementina en ratones CRF-R1 -/-. La administración de trementina en la pata trasera de ratones CRF-R1 -/- produjo una hinchazón levemente menor (15-25 %) de la pata, pero un aumento 10 veces mayor en los niveles plasmáticos de IL-6, en comparación con CRF-R1 + /+ controles. La inflamación local inducida por la trementina produjo elevaciones pronunciadas en las concentraciones plasmáticas de ACTH y corticosterona tanto en CRF-R1 -/- como en ratones de tipo salvaje, pero la secreción de ACTH podría ser inhibida por sueros anti-CRF y anti-AVP solo en ratones salvajes. tipo ratones. Estos datos indican que la secreción de ACTH en reposo en ratones CRF-R1 -/- es en parte atribuible a mecanismos dependientes de AVP. Además, mientras que en ratones normales la respuesta pituitaria-suprarrenal a la inflamación local está mediada en gran medida a través de mecanismos dependientes de CRF, los ratones deficientes en CRF-R1 aún pueden montar una respuesta pituitaria-suprarrenal a través de mecanismos que no dependen críticamente ni de CRF ni de CRF. Acción APV.

Peterson, DA, Dickinson-Anson, HA, Leppert, JT, Lee, KF, calibre, FH Pérdida neuronal central y deterioro del comportamiento en ratones que carecen del receptor de neurotrofina p75. (1999) Revista de Neurología Comparada. 404 (1): 1 20-.

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El receptor de neurotrofinas p75 es un receptor de baja afinidad que se une a las neurotrofinas. Para investigar el papel de p75 en la supervivencia y función de las neuronas centrales, se probaron ratones compañeros de camada de tipo salvaje y mutantes nulos de p75 en tareas conductuales. Los mutantes nulos mostraron déficits de rendimiento significativos en el laberinto de agua, la evitación inhibitoria, la actividad motora y las tareas de habituación que pueden atribuirse a una disfunción cognitiva o pueden representar un deterioro sensoriomotor global. Se evaluó el déficit colinérgico central de los ratones p75 mutantes nulos y de tipo salvaje mediante el uso de estereología cuantitativa para estimar el número total de neuronas en el prosencéfalo basal y el cuerpo estriado y para las subpoblaciones que expresan el receptor de neurotrofina del receptor de tirosina quinasa A (trkA) de alta afinidad y colina acetiltransferasa (ChAT). En el cerebro adulto, las neuronas colinérgicas del prosencéfalo basal reciben soporte trófico derivado del objetivo, mientras que las neuronas colinérgicas del cuerpo estriado no lo reciben. Los ratones adultos con mutación nula p75 tuvieron una reducción significativa del volumen del prosencéfalo basal en un 25 % y tuvieron una pérdida significativa correspondiente del 37 % del total de neuronas del prosencéfalo basal. La población del prosencéfalo basal de neuronas positivas para ChAT en ratones deficientes en p75 disminuyó significativamente en un 27 %, mientras que la población positiva para trkA no cambió significativamente. No hubo cambios significativos en el volumen estriatal o en el número de neuronas estriatales en total o por subpoblación colinérgica. Estos resultados demuestran vulnerabilidad a la falta de p75 en neuronas centrales adultas que dependen de neurotrofinas. Además, la pérdida de neuronas centrales no colinérgicas en ratones que carecen de p75 sugiere un papel para p75 en la supervivencia celular por un mecanismo aún no determinado. Se discuten los posibles efectos directos e indirectos de la pérdida de p75 sobre la supervivencia neuronal.

Smith, GW, Aubry, JM, Dellu, F., Contarino, A., Bilezikjian, LM, Gold, LH, Chen, R., Marchuk, Y., Hauser, C., Bentley, CA, Sawchenko, PE, Koob , GF, Vale, W., Lee, KF Los ratones deficientes en el receptor 1 del factor de liberación de corticotropina muestran una disminución de la ansiedad, una respuesta al estrés alterada y un desarrollo neuroendocrino aberrante. (1998) Neuron. 20 (6): 1093 102-.

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Wang, L., Zoppè, M., Hackeng, TM, Griffin, JH, Lee, KF, Verma, MI Un modelo de ratón con deficiencia de factor IX para la terapia génica de la hemofilia B. (1997) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 94 (21): 11563 6-.

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Antón, ES, Marchionni, MA, Lee, KF, Rakic, P. Papel de la señalización de GGF/neurregulina en las interacciones entre las neuronas migratorias y la glía radial en la corteza cerebral en desarrollo. (1997) Desarrollo. 124 (18): 3501 10-.

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Sarram, S., Lee, KF, Byers, Sr. Inervación dental y CGRP en ratones adultos con deficiencia de p75. (1997) Revista de Neurología Comparada. 385 (2): 297 308-.

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Los tejidos dentales adultos tienen una biología inusual de neurotrofinas. Los fibroblastos pulpares expresan factor de crecimiento nervioso (NGF) y el receptor de neurotrofina p75 de baja afinidad, sus fibras nerviosas sensoriales expresan p75 y trk A, y las fibras simpáticas pulpares carecen de p75. Después de una lesión dental, aumenta el NGF pulpar, brotan terminaciones nerviosas sensoriales y aumenta la inmunorreactividad para el péptido relacionado con el gen de la calcitonina del neuropéptido sensorial (CGRP). En el presente estudio, analizamos la estructura dental y la inervación de la pulpa y el ligamento periodontal en ratones adultos jóvenes (6-8 semanas, 3 meses) y mayores (5-12 meses) portadores de una mutación nula en el gen p75 y comparamos los resultados. con los de los controles de tipo salvaje de la misma edad. Nuestras hipótesis eran que la estructura del diente sería anormal y que la inervación pulpar se reduciría en gran medida porque consiste principalmente en fibras nociceptivas que se han encontrado severamente mermadas en la piel de los ratones p75(-/-). Los tejidos se fijaron, se sometieron a radiografías para determinar la morfología dental macroscópica, se descalcificaron y se analizaron en cuanto a inmunorreactividad para CGRP y para un marcador nervioso general, el producto génico de proteína 9.5. Las radiografías mostraron coronas molares desgastadas en ratones deficientes en p75. La microscopía óptica confirmó el desgaste molar acelerado y mostró una intensa inmunorreactividad de CGRP en las terminaciones nerviosas de la pulpa de ratones mutantes, en comparación con una disminución gradual en la intensidad de CGRP en los controles durante el envejecimiento normal. La intensidad de CGRP en parejas de ratones de 5 a 12 meses de edad fue tres veces mayor en los mutantes (P < 0.03), y en los ratones más jóvenes, el mutante siempre tuvo más CGRP que su control correspondiente. La inervación del ligamento molar en todos los ratones deficientes en p75 fue similar a la de los controles, excepto que hubo brotes de nervios cerca de la pérdida ósea en los mutantes. Los incisivos de los ratones mutantes no tenían un desgaste inusual y su inmunorreactividad pulpar al CGRP se mantuvo normal, pero su ligamento periodontal tenía menos terminaciones nerviosas ramificadas delgadas en todas las edades. Por lo tanto, la mayor parte de la inervación de los dientes y sus tejidos de soporte se desarrollaron normalmente, y los únicos cambios neurales en los ratones mutantes p75(-/-) fueron la reducción de los receptores sensoriales del ligamento incisivo y el aumento del CGRP molar. Los nervios sensoriales en los dientes pierden gradualmente la intensidad de los neuropéptidos durante el envejecimiento, pero eso no sucedió en los ratones mutantes, lo que sugiere que el desgaste molar acelerado estimuló niveles persistentemente altos de CGRP.

Lee, s., Río, C. Efecto del tratamiento repetido con activina-A sobre la actividad del eje hipotálamo-pituitario-gonadal de la rata macho adulta. (1997) Biol. Reprod. 56 (4): 969 75-.

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El presente estudio se llevó a cabo para determinar si la activina A recombinante aumenta los niveles de ARNm del péptido GnRH y si este fenómeno se correlaciona con una mayor liberación de FSH y/o LH. Se encontró que una inyección sc aguda de activina-A (120 microgramos/kg de peso corporal) a ratas macho adultas aumentó significativamente (P < 0.01) los niveles plasmáticos de FSH, sin cambios detectables en la liberación de LH o testosterona (T). De manera similar, no hubo diferencias significativas entre los valores de ARNm de GnRH medidos en el área preóptica medial del hipotálamo. Cuando se administró activina-A sc cada 8 h durante siete tratamientos consecutivos, se obtuvieron resultados similares para la liberación de gonadotropina; además, observamos una regulación positiva significativa (p < 0.01) de los niveles de ARNm de GnRH hipotalámico. La administración de activina-A por vía intracerebroventricular (icv, 6 microgramos/rata) de acuerdo con el mismo programa crónico también produjo un aumento significativo (p < 0.01) en los niveles de FSH, así como una elevación modesta, pero detectable, en las concentraciones de LH, y un gran aumento de la secreción de T. Por el contrario, no hubo cambios en las concentraciones de ARNm de GnRH en estado estacionario. En conjunto, estos resultados muestran que tanto la inyección sistémica (sc) como la central (icv) de activina-A estimulan la secreción de FSH. Si bien originalmente pensamos que la falta de respuesta de las neuronas GnRH hipotalámicas a las inyecciones de activina icv podría deberse a una mayor retroalimentación de esteroides, la observación de que se obtuvieron resultados comparables en ratas intactas y castradas no respalda esta hipótesis. Una posibilidad es que la influencia estimulante informada anteriormente del tratamiento con activina-A icv en las neuronas que fabrican el factor liberador de corticotropina y, en consecuencia, en las concentraciones de catecolaminas circulantes, puede haber aumentado la actividad testicular independientemente de los cambios en la función pituitaria.

Syroid, DE, Maycox, PR, Burrola, PG, Liu, N., Wen, D., Lee, KF, Lemke, G., Kilpatrick, TJ Muerte celular en el linaje de células de Schwann y su regulación por neuregulina. (1996) Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. 93 (17): 9229 34-.

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ElShamy, WM, Linnarsson, S., Lee, KF, Jaenisch, R., Ernfors, P. Requisitos prenatales y posnatales de NT-3 para la supervivencia de los neuroblastos simpáticos y la inervación de objetivos específicos. (1996) Desarrollo. 122 (2): 491 500-.

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Lee, KF, Simon, H., Chen, H., Bates, B., Hung, MC, Hauser, C. Requisito para el receptor de neurregulina erbB2 en el desarrollo neural y cardíaco. (1995) Naturaleza. 378(6555):394-8. DOI: 10.1038/378394a0

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Ernfors, P., Kucera, J., Lee, KF, Loring, J., Jaenisch, R. Estudios sobre el papel fisiológico del factor neurotrófico derivado del cerebro y la neurotrofina-3 en ratones knockout. (1995) Revista Internacional de Biología del Desarrollo. 39 (5): 799 807-.

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Curtis, R., Adryan, KM, Stark, JL, Park, JS, Compton, DL, Weskamp, G., Huber, LJ, Chao, MV, Jaenisch, R., Lee, KF Papel diferencial del receptor de neurotrofinas de baja afinidad (p75) en el transporte axonal retrógrado de las neurotrofinas. (1995) Neuron. 14 (6): 1201 11-.

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Ernfors, P., Lee, KF, Kucera, J., Jaenisch, R. La falta de neurotrofina-3 conduce a deficiencias en el sistema nervioso periférico y a la pérdida de aferentes propioceptivos de las extremidades. (1994) Cell. 77 (4): 503 12-.

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Lee, KF, Davies, AM, Jaenisch, R. Las neuronas sensoriales de la raíz dorsal embrionaria y las neuronas simpáticas neonatales deficientes en p75 muestran una sensibilidad disminuida al NGF. (1994) Desarrollo. 120 (4): 1027 33-.

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Lee, KF, Bachman, K., Landis, S., Jaenisch, R. Dependencia de p75 para la inervación de algunos objetivos simpáticos. (1994) Ciencia. 263 (5152): 1447 9-.

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Ernfors, P., Lee, KF, Jaenisch, R. Los ratones que carecen del factor neurotrófico derivado del cerebro desarrollan déficits sensoriales. (1994) Naturaleza. 368(6467):147-50. DOI: 10.1038/368147a0

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Vassalli, A., Matzuk, MM, Gardner, HA, Lee, KF, Jaenisch, R. La alteración del gen de la subunidad beta B de activina/inhibina conduce a defectos en el desarrollo de los párpados y la reproducción femenina. (1994) Genes y desarrollo. 8 (4): 414 27-.

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Las inhibinas y las activinas son factores de crecimiento diméricos de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta, una clase de péptidos que pueden regular el crecimiento y la diferenciación de una variedad de tipos de células. Recientemente, las activinas se han implicado en el desarrollo temprano de vertebrados a través de su capacidad para evocar, en explantes de embriones de Xenopus, cambios tanto morfológicos como moleculares característicos de la inducción del mesodermo. Para comprender mejor estos procesos, hemos utilizado la recombinación homóloga en células madre embrionarias para crear cepas de ratón que portan mutaciones en el gen que codifica la subunidad beta B de activina/inhibina. Se espera que estos ratones sean deficientes en activina B (beta B:beta B), activina AB (beta A:beta B) e inhibina B (alfa:beta B). Se generaron animales mutantes viables, lo que indica que la subunidad beta B no es esencial para la formación de mesodermo en el ratón. Los animales mutantes padecían, sin embargo, distintos defectos reproductivos y de desarrollo. Una aparente falla en la fusión de los párpados durante el desarrollo embrionario tardío provocó lesiones oculares en animales mutantes. Mientras que los machos con deficiencia de beta B se reprodujeron normalmente, las hembras mutantes manifestaron una capacidad reproductiva profundamente deteriorada, caracterizada por la letalidad perinatal de su descendencia. El fenotipo de los ratones mutantes sugiere que la activina beta B (1) juega un papel en el desarrollo fetal tardío y (2) es fundamental para la fecundidad femenina. Además, hemos encontrado que la expresión de la subunidad beta A relacionada de la activina está altamente regulada al alza en los ovarios de las hembras mutantes. La regulación alterada de la activina beta A en ratones deficientes en beta B puede contribuir al fenotipo mutante.

Ernfors, P., Lee, KF, Jaenisch, R. Acciones locales putativas y derivadas del objetivo de las neurotrofinas en el sistema nervioso periférico. (1994) Avances en la investigación del cerebro. 103: 43-54.

Davies, AM, Lee, KF, Jaenisch, R. Las neuronas sensoriales del trigémino deficientes en p75 tienen una respuesta alterada al NGF pero no a otras neurotrofinas. (1993) Neuron. 11 (4): 565 74-.

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Lee, KF, Li, E., Huber, LJ, Landis, SC, Sharpe, AH, Chao, MV, Jaenisch, R. La mutación dirigida del gen que codifica el receptor p75 de NGF de baja afinidad conduce a deficiencias en el sistema nervioso sensorial periférico. (1992) Cell. 69 (5): 737 49-.

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Rosen, JM, Bayna, E., Lee, KF Análisis de la expresión del gen de la proteína de la leche en ratones transgénicos. (1989) Biología Molecular y Medicina. 6 (6): 501 9-.

Rosen, JM, Poyet, P., Goodman, H., Lee, KF Mecanismos por los cuales la prolactina y los glucocorticoides regulan la expresión del gen de la caseína. (1989) Simposio de la Sociedad de Bioquímica. 55: 115-23.

Lee, KF, Atiee, SH, Henning, SJ, Rosen, JM Contribución relativa del promotor y las secuencias intragénicas en la regulación hormonal de transgenes de beta-caseína de rata. (1989) Endocrinología Molecular. 3(3):447-53. DOI: 10.1210/mend-3-3-447

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Lee, KF, Atiee, SH, Rosen, JM Regulación diferencial de la expresión del gen de fusión de beta-caseína-cloranfenicol acetiltransferasa de rata en ratones transgénicos. (1989) Biología Molecular y Celular. 9 (2): 560 5-.

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Estudios previos en nuestro laboratorio han demostrado la expresión mamaria específica de todo el gen de la beta-caseína de rata con 3.5 kilobases (kb) de 5' y 3.0 kb de 3' de ADN en ratones transgénicos (Lee et al., Nucleic Acids Res. 16 :1027-1041, 1988). En un intento por localizar las secuencias que dictan esta especificidad, se han establecido líneas de ratones transgénicos que portan dos genes diferentes de fusión de promotor de beta-caseína de rata-cloranfenicol acetiltransferasa bacteriana (cat). Se identificaron veintiocho líneas de ratones transgénicos que portaban dos genes de fusión que contenían 2.3 o 0.5 kb, respectivamente, de ADN flanqueante en 5' del gen de la beta-caseína de rata junto con el exón I no codificante y 0.5 kb del intrón A, la mayoría de los cuales transmitió los transgenes a su descendencia en un patrón mendeliano. La actividad CAT se detectó predominantemente en la glándula mamaria lactante de ratones transgénicos hembra, pero no en la almohadilla de grasa mamaria masculina. Se observó una variación de varios cientos de veces en el nivel de expresión de gato en la glándula mamaria de diferentes líneas de ratones, presumiblemente debido al sitio de integración de los transgenes. La actividad de CAT aumentó en la glándula mamaria durante el desarrollo desde la virgen hasta la mitad del embarazo y la lactancia. Inesperadamente, los transgenes de caseína-gato también se expresaron en el timo de diferentes líneas de ratones tanto machos como hembras, en algunos casos a niveles equivalentes a los observados en la glándula mamaria y, en contraste con la glándula mamaria, la actividad de CAT disminuyó durante embarazo y lactancia en el timo. Por tanto, 0.5 kb de ADN flanqueante en 5' del gen de beta-caseína de rata junto con el exón I no codificante y 0.5 kb del intrón A son suficientes para dirigir la expresión del gen cat bacteriano a la glándula mamaria de ratones lactantes.

Lee, KF, DeMayo, FJ, Atiee, SH, Rosen, JM Expresión específica de tejido del gen de beta-caseína de rata en ratones transgénicos. (1988) Investigación de ácidos nucleicos. 16 (3): 1027 41-.

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Kuo-Fen Lee, PhD

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