Transferencia de genes, focalización y terapéutica
Núcleo vectorial viral

Servicios

• Producción de vectores personalizados lentivirales, retrovirales, rAAV, antirrábico con eliminación de G y adenovirales específicos para las necesidades individuales de los investigadores
• Producción y distribución de vectores lentivirales, retroviales, rAAV, antirrábico con eliminación de G y adenovirales que expresan transgenes indicadores
• Consulta sobre diseño experimental, desarrollo y uso de vectores virales personalizados, y producción de plásmidos de transferencia viral específicos del cliente
• Producción y distribución de kits de serotipo rAAV2 que contienen una variedad de vectores en paquetes cruzados: útiles para estudios piloto antes de la producción de vectores personalizados
• Distribución de vectores de clonación e información relevante sobre MTA a los investigadores antes del diseño y la producción de vectores
• Distribución de kits de vectores de reprogramación iPS validados y titulados

Qué proporcionar al núcleo:

1. 200ug (preferiblemente >1ug/ul) de su plásmido lentiviral o rAAV. Si se solicita la producción de rAAV a gran escala, se requieren 500 ug de plásmido rAAV. El ADN debería haberse purificado mediante un protocolo libre de endotoxinas (p. ej., kits de purificación de plásmidos maxi/mega/giga libres de endo o equivalentes). No aceptamos ADN purificado miniprep.
2. Se debe comprobar la pureza del ADN del plásmido y tener un A260/280 de >1.8.
3. Debe comprobarse la recombinación de los plásmidos AAV ITR mediante digestión con SmaI o XmaI. Cada ITR contiene dos sitios SmaI/XmaI: la digestión eliminará su inserción. Cantidades excesivas de plásmido de longitud completa linealizado indican que se ha producido una recombinación.
4. Los plásmidos de transferencia lentiviral y retroviral deben digerirse con las enzimas de restricción adecuadas para confirmar el tamaño correcto del inserto.
5. Proporcione una imagen de gel de su plásmido AAV2 ITR digerido con SmaI o XmaI, o su plásmido de transferencia lentiviral con el inserto cortado.
6. Para evitar la recombinación, recomendamos transformar y cultivar sus plásmidos de transferencia lentiviral y rAAV en células deficientes en recombinación, como STBL3 a 30 °C EN caldo 2XYT durante no más de 16 horas con agitación.
7. Mapa de vectores y archivo de secuencia: le recomendamos que envíe sus plásmidos a nuestra biblioteca de vectores. Estaremos encantados de trabajar con usted para establecer acuerdos MTA para sus reactivos.
8. Información sobre su gen de interés o inserto y cualquier requisito especial para el manejo, por ejemplo, toxicidad, oncogénico, proapoptótico, etc.

Protocolos

Vectores lentivirales

• Producción de vectores lentivirales de VIH-1 pseudotipados VSV.G de tercera generación
• Producción de vectores lentivirales de VIH-1 pseudotipados VSV.G de segunda generación
• Producción modificada de vectores lentivirales de VAIE seudotipados con glicoproteína de la rabia
• Producción modificada de vectores lentivirales de VIH-1 seudotipados con glicoproteínas no VSV

Vectores retrovirales

• Producción de vectores retrovirales MMLV pseudotipados VSV.G (MSCV)

Vectores rAAV

• Producción de vectores rAAV recombinantes empaquetados de forma cruzada mediante purificación en gradiente de densidad
• Purificación secundaria de vectores rAAV después de la separación del gradiente de densidad