Transferencia de genes, focalización y terapéutica
Núcleo vectorial viral

• Producción de vectores lentivirales, retrovirales, AAV, antirrábicos con G-delecionado y adenovirales personalizados
• Producción y distribución de vectores lentivirales, retrovirales, AAV, antirrábicos con G-delecionado y adenovirales que expresan transgenes reporteros
• Asesoramiento sobre diseño experimental, desarrollo y utilización de vectores virales personalizados
• Producción y distribución de kits de serotipos de AAV útiles para estudios piloto

Qué proporcionar al núcleo:

1. 200 ug (preferiblemente >1 ug/ul) de su plásmido lentiviral o AAV. Si se solicita una producción de AAV a gran escala, se requieren 500 ug de plásmido AAV. El ADN debe haberse purificado utilizando un protocolo libre de endotoxinas (por ejemplo, kits de purificación de plásmidos maxi/mega/giga sin endotoxinas o equivalentes). No aceptamos ADN purificado en minipreparación.
2. Se debe comprobar la pureza del ADN del plásmido y tener un A260/280 de >1.8.
3. Los plásmidos ITR de AAV deben analizarse para detectar la recombinación mediante digestión con SmaI o XmaI. Cada ITR contiene dos sitios SmaI/XmaI; la digestión eliminará el inserto. Las cantidades excesivas de plásmido linealizado de longitud completa indican que se ha producido una recombinación.
4. Los plásmidos de transferencia lentivirales y retrovirales deben confirmarse mediante digestión enzimática o secuenciación.
5. Proporcione una imagen de gel de su plásmido AAV2 ITR digerido con SmaI o XmaI, o su plásmido de transferencia lentiviral con el inserto cortado.
6. Para evitar la recombinación, recomendamos transformar y cultivar sus plásmidos de transferencia lentivirales y AAV en células deficientes en recombinación, como STBL3, a 30 °C en caldo 2XYT durante no más de 16 horas.
7. Mapa vectorial y archivo de secuencia, si está disponible.
8. Información sobre su gen de interés o inserte cualquier requerimiento especial para su manejo: tóxico, oncogénico, proapoptótico, etc.

Documentos recientes de interés

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Enlaces útiles

• Producción y caracterización de vectores virales recombinantes adenoasociados – Laboratorio Samulski
• Addgene – distribución de plásmidos útiles, incluidos sistemas de empaquetamiento lentiviral de segunda y tercera generación.