Celtechnologieën en technische kern

De Cell Technologies and Engineering Core beschikt over 3 celkweekruimtes, 2 labtafels en celanalyseruimtes. Elke celkweekruimte is uitgerust met 3-4 bioveiligheidskasten, 6-8 CO2-incubatoren, een zuurstofarme incubator, omgekeerde microscopen en de benodigde apparatuur voor stamcelkweek. Het CTEC bevindt zich naast het Flowcytometrie kernfaciliteit waardoor efficiënte celsortering en cytometrie-analyse-experimenten mogelijk zijn.

Technologiepartners

Cel beeldvorming
2x Dissectiemicroscopen voor handmatige isolatie en manipulatie van stamcelkolonies
SeaHorse 96XFe voor celanalyse
2x Discover Echo Cellcyte live-cel-imagers gehuisvest in CO₂ incubators
Maxwell Multielektrode-arraysysteem voor neuronactiviteitsanalyse

Cel cultuur
11x Biologische veiligheidskasten
18x C0₂ Laboratorium incubator
3x N2/C0₂ Incubatoren (hypoxische omstandigheden)
3x tafelmodel centrifuges
3x 37°C Waterbaden

Transfectie
LifeTech Neon – Op tip gebaseerde elektroporatie (instelbare parameters)
MaxCyte ExPERT A+X elektroporator (op cuvetten gebaseerd; vaste parameter)

Centrifugatie
Optima L-80XP ultracentrifuge
Allegra X-15R Platencentrifuge
Tafelmodel temperatuurgestuurde centrifuge en microcentrifuge

Koelkasten en diepvriezers
3x -80°C vriezers
10x -20°C vriezers
6x 4°C koelkasten
2x Deli koelkasten met hoge capaciteit
2x MVE 800 Series Cyrostorage vriezers – 11664 flesjes capaciteit, automatische vulcontrollers
2x LABS40K Cryostorage vriezers met hoge capaciteit – capaciteit van 31590 flesjes, automatische vulcontrollers

Services

Biopsieverwerking (fibroblast derivatie)
Herprogrammering van fibs of PBMC's
Aangepaste genoombewerking
iPSC QC (op aanvraag)

• Karyotypering
• Mycoplasma-testen
• STR
• Ongedifferentieerd staatspaneel
• TriLineage-differentiatie
• Genoomretentie-analyses van het Sendai-virus

Fib QC (op aanvraag)

• Mycoplasma
• Groei percentage
• STR-profilering (alleen voor mensen)

Kwaliteitscontrole genoombewerking (op aanvraag)

• Mycoplasma
• Allelensequentie
• STR

Diensten voor de ontwikkeling van muismodellen

• CRISPR-ontwerp
• CRISPR-genotypering
• Aangepast klonen/vectorontwerp en -constructie
• De novo ES-celafleiding
• DR4 en CF1 mEF-cellen
• Uitbreiding van ES-cellen
• Gen-targeting

Toegang:
De Cell Technologies and Engineering Core Facility is 7 dagen per week, 24 uur per dag beschikbaar voor onderzoekers. Toegang tot de faciliteit moet vooraf worden aangevraagd en goedgekeurd door de CTEC.

Gebruiksvoorwaarden:

1. De Core Director moet eerst alle nieuwe cellijnen goedkeuren die in de faciliteit worden gebracht, inclusief zowel levende als bevroren celculturen, van zowel commerciële als academische bronnen. Alle nieuwe, goedgekeurde cellijnen worden gekweekt onder quarantaineomstandigheden totdat ze in 2 opeenvolgende tests schoon zijn getest op mycoplasma.
2. Alle nieuwe CTEC-gebruikers moeten worden goedgekeurd door de kerndirecteur of labmanager en moeten een korte oriëntatie met hem/haar doorlopen.
3. Neem geen eerder geopende reagentia, benodigdheden of materialen van andere labs mee naar de faciliteit. In sommige gevallen kan dit nodig zijn, maar moet dit eerst worden goedgekeurd door de Core Director. Ongeopende, rechtstreeks van de leverancier afkomstige, celkweekmedia en -materialen mogen naar de faciliteit worden gebracht.

SCRO-goedkeuringen, ethiektrainingen en MTA's:
Voor elk onderzoek met menselijke pluripotente stamcellen bij het Salk Institute is het volgende vereist:

1. een door SCRO goedgekeurd protocol en
2. Ethische training voor de onderzoekers en PI die bij de experimenten betrokken zijn.

Raadpleeg de SCRO-website voor informatie over het voldoen aan deze vereisten. De vereisten voor goedkeuring variëren afhankelijk van het onderzoeksproject. De Core Director en het personeel kunnen nieuwe onderzoekers helpen met het proces van het invullen van SCRO-protocollen. Voor trainingsdoeleinden kunnen nieuwe onderzoekers beginnen met werken onder het bestaande trainingsprotocol voor stamcelkweektechnieken. Echter, aangezien de onderzoeker(s) hun eigen onderzoeksproject ontwikkelen, moet er aparte SCRO-goedkeuring worden verkregen.

Informatie over ethiektraining is online te vinden hier"

Salk-onderzoekers die in het CTEC werken, vallen onder de bestaande MTA's voor de aangeboden cellijnen. Mocht een onderzoeker een van de onderstaande cellijnen in zijn eigen laboratorium willen kweken, dan moet er een aparte MTA worden uitgevoerd.

Cellijnen beschikbaar

Alle cellijnen zijn karyotypisch stabiel, pathogeenvrij en gekweekt zonder antibiotica. Extra cellijnen beschikbaar op aanvraag.

Menselijke embryonale stamcellijnen beschikbaar:

Menselijk geïnduceerde pluripotente stamcellijnen beschikbaar:
Ziektespecifieke iPSC's: Bent u op zoek naar een specifieke ziektegerelateerde iPSC-lijn? Misschien bestaat het al en kunnen we u misschien helpen het te vinden.

Andere beschikbare celtypes:
Keratinocyten-volwassene
Keratinocyten-Neo Natal
BJ fibroblasten
IMR90's
OP9's
293Ts
HFF's
MEF's
HUVEC

MTA-overwegingen
Salk-onderzoekers die in het CTEC werken, vallen onder de bestaande MTA's voor de aangeboden cellijnen. Mocht een onderzoeker een van deze cellijnen in zijn eigen lab willen kweken, dan moet er een aparte MTA worden uitgevoerd.